1．灭菌小试管

2. 刻度吸管

3. 微量加样器

4. 离心机

5. L形玻璃棒

1．LB 液体培养基
2．75mM CaCl₂

3．氨苄青霉素琼脂平板（50ug/ml）

1. 感受态菌的制备

   1) 将细菌接种于5ml LB液体培养基中，37℃振荡培养16~20h。
   2) 取新鲜菌液，按1/100的接种量接种于LB培养基中，37℃振荡培养2~3h。
   3) 取1.5ml菌液，4℃ 3000rpm/min,离心5min，弃上清。
   4) 菌体沉淀加入750μl预冷的（4℃）75mmol/L CaCl₂ 溶液，轻轻吹打菌悬液，放冰浴30min。
   5) 4℃3000rpm/min,离心5min，弃上清。
   6) 菌体沉淀加入200微升预冷的75mmol/LCaCl₂溶液，冰浴4min以上。4℃保存备用。
2. 质粒转化
   1) 取2个洁净，灭菌的EP管，加入各成分。　　　　　　　
   2) 上述2个试管充分混均匀后，置冰浴30min。
   3) 42℃2min或37℃5min，立即置冰浴2min。
   4) 加入1ml LB肉汤培养基，37℃静止培养1h。

3. 转化子筛选
   1) 取实验组培养菌液涂布在氨苄青霉素琼脂平板（50ug/ml）上，对照组菌液分别涂布在无药LB琼脂平板和氨苄青霉素琼脂平板上，每块板涂0.1ml，用灭菌L形玻璃棒涂匀。将涂好的平板置37℃培养过夜，观察转化结果。
   2) E.coli 受体菌不含有质粒DNA，也不含Apr和Tcr 。在含Ap和Tc的培养基中不能生长,若实验组在含Ap和Tc的平板上出现菌落，可初步确定受体菌获得了耐药性质粒，然后再通过提取质粒DNA进一步鉴定转化子。