（1）总过程：

分---PCR分离目的基因（PCR克隆、同源克隆、文库筛选）

切---限制性内切酶切割（粘性末端、平末端）

接---目的基因与载体相连（限制性内切酶切割）

转---转入宿主细胞

筛---筛选阳性重组体

原理：利用DNA聚合酶反应时都有在PCR产物的3’末端添加一个或者几个A碱基的特性和利用T载体3’末端的T碱基和PCR产物的A碱基互补配对，经连接酶作用，完成与载体的连接。

感受态细胞：经过电击、 CaCl2、 RuCl等化学试剂处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。